Pep Guardiolas hold smadrede Madrid med 5-1 sammenlagt i sidste sæsons semifinaler, og Ancelotti opfordrede sine spillere til at vise mere mental styrke denne gang.
De 14-dobbelte vindere fra Madrid tager imod de regerende mestre fra City på Santiago Bernabeu på tirsdag i en spændende kvartfinalekamp.
"Vi spillede uden mod, uden personlighed - mod og personlighed er fundamentale i denne type kampe, og vi manglede dem i returkampen," sagde Ancelotti på en pressekonference.
Efter uafgjort 1-1 i den spanske hovedstad, faldt Madrid fuldstændig fra hinanden i returmødet, og led et stort 4-0-nederlag på Etihad Stadium.
Ancelotti sagde, at hans spillere skal være mentalt stærke mod City, men indrømmede, at han var nervøs før kampen.
"Det vigtige er at være på toppen, det mentale aspekt er meget vigtigt," fortsatte Ancelotti.
"Med hensyn til mod og personlighed har vi haft tid til at forberede os til kampen, vi har forberedt os rigtig godt, og jeg er sikker på, at vi vil yde vores bedste, og vi har kvaliteten til at konkurrere."
På trods af at han har vundet turneringen fire gange, to gange med AC Milan og to gange med Madrid, hvilket er mere end nogen anden manager, indrømmede Ancelotti sin egen anspændthed før opgøret.
"(Jeg er) meget nervøs, før en kamp på det personlige plan er det hele lidelse," sagde træneren.
"Nederlag er lidelse, og sejr er lettelse, ikke lykke... lidelse og stress holder dig i live, det er benzin for mig."
I sidste sæson holdt Madrids forsvarsspiller Antonio Rüdiger Erling Haaland og hans holdkammerater, relativt i ro i det første opgør, men Ancelotti lod ikke tyskeren starte inde i Etihad-kampen.
"(Det første opgør) var en god kamp, og vi forhindrede Haaland i at få afleveringer," sagde Rüdiger til journalisterne.
"Træneren undskyldte ikke (for at sætte mig af), og det behøver han heller ikke, jeg accepterer det, selvom den var svær at sluge.
"I denne kamp er planen at forsøge at kontrollere farlige spillere som Phil Foden, (Kevin) De Bruyne og selvfølgelig Haaland."
Rüdiger sagde, at han ville gå til kampen mod den norske hitman med alt, hvad han havde.
"Det handler om holdet, men jeg vil tage den duel, som om den er personlig, som en forsvarsspiller mod en superangriber som Haaland," tilføjede han.